Molecular And Translational Oncology - 41 Ciclo

I linfociti Th17 sono legati al cancro, alle malattie autoimmuni e alle malattie virali (Tesmer LA et al., 2008). Nel cancro è stato osservato un aumento dei livelli di Th17 e delle citochine correlate. La differenziazione Th17 dipende da diversi componenti, tra cui la serina/treonina chinasi SGK1 (Wu C et al., 2013). SGK1 controlla l'espressione di RANBP1, implicata nella mitosi e nel trasporto nucleare (Amato R et al., 2013). Questo progetto si concentra sulla comprensione del ruolo di RANBP1 nella modulazione dei Th17 per il trattamento dei tumori colon-rettali. Metodi: Studieremo Buffy coats da donatori sani e neoplastici per isolare le cellule CD4+ e Th17 e i campioni ortologhi di tumori del colon e di tessuto sano adiacente derivato da pazienti con ca colon-rettale o pazienti non neoplastici sottoposti ad interventi del colon, secondo le linee guida per cause non neoplastiche. Gli studi di espressione genica per la firma Th17 saranno condotti mediante WB, IF su cellule intatte, Realtime PCR e approcci FACS. Utilizzeremo approcci di sovra-espressione lentivirale e di silenziamento genico stabile per misurare le fluttuazioni di RANBP1 e determinare il suo ruolo nella maturazione Th17. Verranno eseguiti saggi IF ed estrazioni differenziali nucleo-citoplasmatiche per determinare il ruolo della modulazione di RANBP1 sul trasporto nucleare dei Th17. Gli studi di metabolomica funzionale saranno eseguiti con approcci Sea- Horse e HPLC intracellulari e gli studi di modulazione delle citochine condotti con approccio Fluo-EliSpot. Saranno allestiti studi di co-cultura linfociti/tessuto neoplastico e modelli 3D per la validazione micro-ambientale Obiettivi: Studieremo in modelli primari di tumori interazione tra cellule Th17 e tumorali. Identificheremo i geni e le citochine che controllano la differenziazione dei Th17 e la deplezione dei Treg. In collaborazione con la UO di Chirurgia generale della Az Universitaria Dulbecco, si procederà alle correlazioni clinico-molecolari a fini prognostici e predittivi e per la caratterizzazione clinico-molecolare di eventuali nuovi bio-marcatori immunologici. Recenti evidenze dimostrano che RANBP1 influenza il quadro secretorio e metabolico dei linfociti TH17 in modo tale da alterare la plasticità e i comportamenti tossici dei Th17. Gli studi di onco-immuno- metabolomica saranno utilizzati per esplorare questo aspetto. Conclusioni: Questo nuovo meccanismo ha completato la delineazione di una via cruciale per i processi di differenziazione dei linfociti, che potrebbe portare a nuovi sbocchi non solo per la comprensione dei meccanismi di base della plasticità dei Th17, ma anche per le prospettive future di modulazione farmacologica attraverso la manipolazione mirata di questa via di segnalazione nel cancro.